OPTIMIZACIÓN DE LOS PROTOCOLOS DE EXTRACCIÓN DE ADN Y DEL MARCADOR MOLECULAR TIPO RAPD EN ANONÁCEAS

Yanet Alfonso Alonso

Resumen

Las técnicas moleculares requieren de
protocolos que permitan determinar los niveles de variación
genética, dentro de las poblaciones en diferentes condiciones
ambientales. Tanto la optimización del aislamiento del ADN,
como el de las condiciones de trabajo de las amplificaciones,
son fundamentales para alcanzar el éxito de los análisis
moleculares, por lo que la presente investigación tiene como
objetivo: optimizar los protocolos de extracción de ADN y
del marcador molecular tipo RAPD (Random Amplified
Polymorphic DNA) en Anonáceas. Para la extracción de
ADN se utilizaron los Kit Nucleon PHYTOpure y DNeasy®
de QIAGEN. Se ajustaron las condiciones de trabajo
del protocolo de amplificación, en el que se variaron las
concentraciones de ADN y las de los cebadores utilizados.
Seguido de esto, se realizó un testaje con diez cebadores
de la serie OPH y cinco de la serie OPA, para seleccionar
los más polimórficos. Los primeros resultados con el Kit
Nucleon PHYTO pure mostraron un ADN de baja calidad,
debido a la alta fenolización del material vegetal, no así con
el Kit DNeasy® de QIAGEN, que permitió obtener un ADN
de calidad, pureza y homogeneidad a una concentración
aproximada de 30 ng μL-1. Los mayores productos de
amplificación se obtuvieron al usar 3 ng μL-1 de cebador y
2 ng μL-1 de ADN. Los cuatro cebadores que presentaron
mayor polimorfismo fueron OPA-16, OPH-03, OPH-13 y
OPH-18. Los resultados de esta investigación permitieron
optimizar las condiciones de trabajo de la técnica RAPD
para la caracterización de la colección ex situ de Anonáceas
bajo nuestras condiciones ambientales.

Palabras clave

aislamiento de ADN, Annonaceae, RAPD

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