PURIFICACI�?N Y CARACTERIZACI�?N PARCIAL DE ACTIVIDADES lectina DE Lupinus albus SEMILLAS

Resumen

En un trabajo anterior los autores estudiaron la actividad hemaglutinante presente en semillas de tres especies de Lupinus; a partir de esos resultados se decidió purificar las actividades lectínicas presentes en semillas de Lupinus albus, tomando en cuenta las mayores especificidades encontradas previamente en los extractos. En este trabajo se prepararon tres columnas apropiadas de afinidad, con el fin de purificar la actividad hemaglutinante de L. albus. El pellet colectado por centrifugación a partir del extracto previamente saturado con 80 % de sulfato de amonio, fue aplicado respectivamante en tres columnas de afinidad: Mucina-Sepharosa, Fetuina- Sepharosa y Galactosa-Agarosa. Aunque fue purificada, a través de las columnas de Fetuina y Mucina, una actividad lectínica equivalente al 5 % aproximado del total de proteína encontrado en el extracto, la actividad hemaglutinante pasó a través de la columna sin aparentemente interactuar con las proteínas fijadas en cada una de las columnas probadas. Las proteínas colectadas en los picos de elusión de las corridas cromatográficas fueron parcialmente caracterizadas mediante electroforesis en poliacrilamida y filtración en gel a través de una columna de Superosa 12, con el fin de conocer acerca de su composición monomérica y oligomérica y sus pesos moleculares. Se analizó, además, la posible estructura secundaria de la proteína a partir de un espectro de dicroismo circular realizado a la muestra.