Para la caracterización cultural se tuvo en cuenta la coloración, la mucosidad y la morfología de la colonia. Las que presentaron coloración traslúcida, mucosidad ligera, bordes lisos y elevación plana ⁵, fueron purificadas mediante pases sucesivos por estría en medio LB. Luego se realizó la tinción de Gram y se seleccionaron los aislados gramnegativos, con morfología bacilar o cocobacilar y no esporulados, que posteriormente se sembraron por punción en los medios carentes de nitrógeno, Rennie y JMV. Los aislados que crecieron en estos medios se clasificaron como nitrofijadores.

En este ensayo se evaluó la capacidad de los aislados para solubilizar fósforo y potasio, además se determinó la actividad antagónica frente a Fusarium oxysporum.

La solubilización de fosfato se determinó en medio NBRIP utilizando el indicador púrpura de bromocresol; además se probaron tres fuentes de fósforo inorgánico diferentes: fosfato tricálcico (Ca₃(PO₄)₂), fosfato de aluminio (AlPO₄) y fosfato de hierro (FePO₄). Las bacterias se sembraron por puntos de alrededor de 0,5 cm de diámetro a razón de cinco aislados por placa y se establecieron tres réplicas por cada uno. Las placas se incubaron a 28 ºC durante 48 h. Se tomaron como resultados positivos aquellos aislados que presentaron un halo amarillo alrededor del crecimiento, indicando la solubilización de las sales de fosfato.

Siguiendo el mismo procedimiento, se determinó la capacidad de solubilización de potasio en el medio Alexandrov, utilizando como fuentes de potasio el hidrógeno fosfato dipotásico (K₂HPO₄) y el óxido de potasio (K₂O). Las placas se incubaron a 28 ºC durante 48 h y se tomaron como resultados positivos los aislados que presentaron halo de solubilización alrededor de las colonias.

Para determinar la actividad antagónica frente a la cepa Fusarium oxysporum EC20-E-GM (perteneciente al cepario del laboratorio de fitopatología del Centro de Investigaciones Biotecnológicas del Ecuador), se procedió al corte del micelio con bisturí estéril. Este fue colocado en tubo Falcon con 20 mL de agua destilada estéril y posteriormente se añadieron balines de acero esterilizados, de 4 mm de diámetro. Se agitó vigorosamente el frasco de forma manual durante 5 min y se filtró el contenido con un tamiz de 40 μm montado sobre un tubo Falcón estéril. Se sembraron por diseminación 200 μl de la solución tamizada en Agar Papa Dextrosa y sobre esto se sembraron los aislados bacterianos en forma de punto a razón de cuatro aislados por placa. La incubación fue a 28 ºC durante siete días. Se tomaron como resultados positivos a la actividad antagónica los aislados que presentaron halo de inhibición del crecimiento fúngico con un radio mayor de 0,5 mm.

La extracción del material genético se realizó por lisis alcalina. Se tomó una colonia del cultivo axénico y se colocó en Eppendorf con 40 μl de NaOH a 0,20 M. Posteriormente se calentó en microondas a 10 % de potencia de 700 W por un minuto e inmediatamente se enfrió en hielo durante 5 min. Las células lisadas se centrifugaron durante 10 min a 10,000 gravedades. Se tomó el sobrenadante y se realizó la cuantificación de ácidos nucleicos por espectrofotometría, utilizando el NanoDropTM 2000 a 260 nm y se calculó la razón 260/280 y 260/230 en búsqueda de determinar la concentración y calidad del ADN, respectivamente.

Para la amplificación se utilizaron 25 μl de la mezcla de PCR que contenía 1 μl del extracto crudo conteniendo ADN, 1 μl (10 μM) de los cebadores universales 27F (5‘-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3‘) y 1492R (5‘-GGTTACCTTGTTACGACTT-3‘) ¹⁰, que permiten obtener amplicones de alrededor de 1500 pb, y GoTaq® Green Master Mix (Promega Corporation, USA). La amplificación se realizó en un termociclador MS mini (Major Science, USA) bajo los siguientes parámetros: desnaturalización inicial 95 °C por 10 minutos y desnaturalización adicional de1 minuto a 92 °C, 35 ciclos de 72 °C cada uno, durante 2 minutos. Los productos de la amplificación se verificaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 1 % (1 g de agarosa en 150 mL de buffer TAE 1X) a 80 V durante 45 min. La secuenciación se realizó por el método de Sanger en la compañía Macrogen^®.

Se realizó un análisis de calidad de las secuencias obtenidas mediante el programa FinchTV (ver. 1.4.0) (Geospiza Inc.) usando como criterio de aceptación un valor de calidad (Q) igual o superior a 20 por base. Posteriormente se analizaron usando el programa BLASTn ¹¹. El valor de corte utilizado fue de 1 x 10^-5, con una cobertura mínima de aproximadamente el 80 %. La depuración y el alineamiento de las secuencias obtenidas se realizaron usando la herramienta de alineación de secuencias múltiples ClustalW ¹² en el programa MEGA-X (ver. 10.0.4) ¹³.

Los 59 aislados obtenidos presentaron colonias planas, traslúcidas, ligeramente mucosas y con bordes lisos, características semejantes a las descritas por Granada ⁵. De estos, el 86,4 % (51 aislados) resultaron gramnegativas y, a su vez, el 94,1 % (48 aislados) coincidió con las especificaciones morfológicas propuestas para el género Stenotrophomonas: bacilos o cocobacilos gramnegativos, no esporulados. En el suelo se desarrollan muchos géneros bacterianos; sin embargo, en números absolutos, existe un predominio de bacterias gramnegativas sobre las grampositivas ¹⁵. En el caso particular de la rizosfera, las raíces tienen una influencia directa en la composición y densidad de la microbiota del suelo. La liberación de sustancias orgánicas vegetales favorece el establecimiento de poblaciones microbianas heterótrofas que, en su mayoría, comprenden bacilos gramnegativos y actinomicetos ¹⁵.

El género Stenotrophomonas presenta la capacidad de realizar la FBN, por lo que se utilizaron los medios Rennie y JMV para descartar aquellos aislados que no realizan esta función y el 41,7 % (20 aislados) crecieron en los medios. Los suelos Ferralíticos Rojos son los más comunes en la llanura Habana-Matanzas, zona que contempla el área muestreada. Por lo general, la productividad de estos suelos es alta debido a la profundidad y características de sus horizontes; sin embargo, son pobres en materia orgánica y presentan una baja fertilidad ⁹, lo cual puede traducirse en pobres concentraciones de nitrógeno. Estas características podrían favorecer la proliferación y actividad de microorganismos diazotróficos como Stenotrophomonas. La FBN ocurre en función de la concentración del elemento en el medio, respondiendo al principio de economía celular. La presencia de altas concentraciones de compuestos nitrogenados inhibe la síntesis de la nitrogenasa, enzima responsable del proceso, mediante la represión de la expresión de los genes nif que la codifican. De esta manera, el microorganismo utiliza preferentemente estos elementos como fuente de nitrógeno, en lugar de realizar un proceso que implica un alto consumo energético, como lo es la FBN. Por otro lado se plantea que cualquier deficiencia en los compuestos nitrogenados orgánicos e inorgánicos, estimula la fijación microbiana de N₂^16,17.

Los medios utilizados en el aislamiento de bacterias nitrofijadoras carecían totalmente de fuentes de nitrógeno e incluían en su composición, la sal molibdato de sodio dihidratado (Na₂MoO₄.2H₂O) como fuente de molibdeno, componente estructural de la enzima nitrogenasa ¹⁷. Ambos aspectos favorecieron la síntesis y actividad de la enzima y, por lo tanto, permitieron el crecimiento microbiano en estas condiciones.

Los 20 aislados que mostraron la capacidad de realizar la FBN, crecieron en el medio NBRIP. La fuente de carbono presente en dicho medio es la glucosa, que constituye el azúcar más utilizado como fuente de carbono en los medios de cultivo y son pocos los microorganismos con la incapacidad de metabolizarla ¹⁷.

El 75 % (15 aislados) de estos aislados desarrollaron halo de solubilización frente a las diferentes fuentes de fósforo utilizadas (Tabla 1).

El fosfato de aluminio fue la fuente menos consumida, con nueve aislados; mientras que el fosfato tricálcico y el fosfato de hierro fueron más exitosos con 13 y 15 aislados, respectivamente. El contenido de hierro en los suelos Ferralíticos Rojos es elevado ⁹, por lo que es más probable que el fosfato establezca uniones con los iones férricos en comparación con otros iones y, a su vez, los microorganismos presentes en estos suelos estén más familiarizados con estos compuestos.

La formación de los halos de solubilización se produce como consecuencia del intercambio catiónico que realizan ácidos orgánicos secretados por las bacterias. Estos compuestos convierten el fosfato insoluble a formas solubles de la sal ¹⁸.

Por otro lado, la presencia o no del halo alrededor de la colonia no es criterio suficiente para clasificar a los microorganismos como solubilizadores de fósforo ¹⁹. La solubilización de sales de fósforo pudiera ocurrir por la unión de un agente quelante a los cationes, desplazando a los grupos fosfatos. Estas reacciones, aunque permiten la solubilización del fosfato no producen halo en el medio de cultivo; por lo que si bien no se puede descartar la posibilidad de que algunos de los aislados aquí estudiados no tengan la capacidad de solubilizar alguna de las sales de fosfato empleadas, sí pudieran existir aislados con potencialidades solubilizadoras y por la metodología empleada no se han podido determinar ²⁰.

En cuanto a la solubilización de potasio, el 60 % (12 aislados) crecieron en el medio Aleksandrov y de estos el 16,6 % (2 aislados) desarrollaron halo de solubilización. Este medio tiene como fuente de carbono y componente mayoritario la sacarosa, disacárido que no constituye la fuente de carbono más atractiva para la mayoría de los microorganismos.

Algunos autores asocian la solubilización de potasio con la producción de ácidos de origen microbiano ²¹ . Éste pudiera haber sido el mecanismo empleado para formar el halo de solubilización. Sin embargo, al igual que en la solubilización de fosfato, hay estudios que indican que esta ocurre sin la liberación de ácidos al medio y, por consiguiente, sin la disminución del pH ²².

La actividad antagónica frente a Fusarium oxysporum fue positiva en el 30 % (6 aislados). El maíz en los ambientes tropicales es atacado por un gran número de patógenos que causan importantes daños económicos a su producción. Entre estos destacan especies del género Fusarium²³ causantes de pudriciones de mazorca, que además de reducir el rendimiento son causa del deterioro y mala calidad de los granos y debido a la capacidad de producir micotoxinas, también están relacionadas con enfermedades en sus comensales ²⁴.

Se identificaron cuatro géneros bacterianos pertenecientes al Phylum Proteobacteria, grupo especialmente abundante en la rizosfera durante los diferentes estadíos fenológicos del maíz ^25,26. Estos incluyeron a Enterobacter, Pseudomonas, Rhizobium y Stenotrophomonas con un porciento de identidad mayor o igual a 97 en el 95 % de los casos (Tabla 2).

Los géneros más representativos fueron Stenotrophomonas y Pseudomonas, para un 35 % del total en cada caso (7 aislados). Resultados similares fueron obtenidos por otros autores ⁶ en rizosfera de Daucus carota L. En menor medida se identificaron los géneros Rhizobium y Enterobacter con un 25 % (5 aislados) y 5 % (1 aislado) de aparición, respectivamente.

Es común encontrar reportes de patogenicidad asociado a los géneros Stenotrophomonas, Pseudomonas y Enterobacter, en humanos, en animales e incluso en plantas ^27-30. Sin embargo, en muchas ocasiones, la presencia de factores de virulencia y la patogenicidad de los microorganismos se restringen a especies, e incluso a cepas específicas dentro de un género ¹⁷. El carácter patogénico que pudieran presentar algunos de estos géneros, no resta mérito a las potencialidades bioestimulantes que desarrollan en plantas; aunque no quedan eximidos de los exámenes eco-toxicológicos establecidos para la explotación agrícola de microorganismos.

El género Pseudomonas se ha reportado ampliamente como PGPR de diversas plantas incluyendo las gramíneas ^5,6,15,31. Es frecuente que las poblaciones de Pseudomonas sobresalgan por encima de otros géneros diazotróficos, debido a su corto período de latencia, rápida tasa de crecimiento y versatilidad metabólica ³². Por otro lado, Enterobacter se ha descrito como microorganismo rizosférico y sobre todo, como endófito de diferentes especies vegetales; destacando por sus características como promotores del crecimiento ^33,34.

En el caso del género Rhizobium, se han realizado aislamientos como endófitos de maíz ³⁵ y en menor medida, de la rizosfera ³⁶, fundamentalmente en suelos donde se aplica el sistema de rotación de cultivo con alguna especie leguminosa. El uso de Phaseolus vulgaris L. como cultivo de rotación en este estudio, pudo haber favorecido el establecimiento de poblaciones de rizobios, puesto que esta leguminosa presenta mayor susceptibilidad a la colonización y establecimiento de la simbiosis con especies del género Rhizobium, con respecto a otros géneros de rizobios ³⁷.

Stenotrophomonas se ha aislado de diversos ambientes, desde diferentes tipos de suelos hasta tractos intestinales de animales ³⁸, lo cual resalta el carácter ubicuo de esta bacteria. La especie Stenotrophomonas pavanii se utiliza en procesos de biorremediación a nivel industrial ³⁹ y agrícola ⁴⁰, mientras que Stenotrophomonas maltophilia tiene un comportamiento contrastante en los diferentes hábitats que ocupa.

Esta especie es común en ambientes intrahospitalarios y algunas cepas están descritas como potentes agentes nosocomiales; sin embargo, se describe como parte de la microbiota edáfica normal y se asocia a muchos cultivos de interés agrícola sin ocasionar daños a los mismos ⁴¹. De igual forma ocurre con Stenotrophomonas rhizophila, que muestra un gran potencial para promover el crecimiento de las plantas como la soya ⁴², algodón, tomate y pimiento entre otros; y es considerada microbiota planctónica de ambientes marinos ⁴³.

En este estudio el aislado más integral en cuanto a los mecanismos de promoción del crecimiento vegetal evaluados, fue INCA-FRr1, identificado como Stenotrophomonas rhizophila. La capacidad de solubilizar diferentes fuentes de fósforo y potasio, de realizar la FBN y la actividad antagónica frente a fitopatógenos, además de otras características positivas que no se demostraron en este estudio pero que son conocidas ⁶; representan ventajas claras con respecto a otros géneros bacterianos rizosféricos ⁴³; por el contrario, utilizan una cepa de Stenotrophomonas rhizophila que no presenta la capacidad de realizar la FBN y aun así obtienen resultados importantes en cuanto a desarrollo de variables como: altura, longitud de tallo y raíz, biomasa seca área y foliar en plantas de albahaca.

Esto podría sugerir la presencia de otros mecanismos de promoción del crecimiento vegetal. En ensayos de co-inoculación de Stenotrophomonas rhizophila con Hongos Micorrízicos Arbusculares (HMA), en comparación con las inoculaciones simples, se percibe un aumento en el crecimiento de las plantas y en el contenido de clorofilas ⁴⁴; por consiguiente, la bacteria también es calificada como potenciadora de la micorrización (termino conocido como Mycorrhiza Helper Bacteria, MHB) ^45,46.

El éxito de la utilización de bioproductos radica, entre otros aspectos, en la obtención de cepas compatibles al cultivo en cuestión ⁴⁷ y eficientes para la lograr los rendimientos deseados. De esta forma, la utilización de PGPR nativas como inoculantes, promueve el manejo ecológico-sostenible de los agroecosistemas y podría mejorar la producción de maíz. La capacidad de las cepas nativas para interactuar positivamente con la microbiota edáfica residente y su adaptabilidad a las condiciones climáticas y agroecológicas locales, a menudo potencia su rendimiento en comparación con cepas alóctonas.

For the cultural characterization, the coloration, mucus and morphology of the colony were taken into account. Successive striating in LB medium purified those with translucent coloration, light mucus, smooth edges and flat elevation ⁵. Then Gram staining was performed and gram-negative isolates with bacillary or cocobacillary morphology and non-sporulated were selected, which were subsequently punctured in the nitrogen-free media, Rennie and JMV. The isolates that grew in these media were as nitrofixers classified.

In the test, the capacity of the isolates to solubilize phosphorus and potassium was evaluated, in addition the antagonistic activity against Fusarium oxysporum was determined.

Phosphate solubilization was determined in NBRIP medium using the bromocresol purple indicator, In addition, three different sources of inorganic phosphorus were tested: tricalcium phosphate (Ca₃(PO₄)₂), aluminum phosphate (AlPO₄) and iron phosphate (FePO₄). The bacteria were by spots around 0.5 cm in diameter seeded, at the rate of five isolates per plate, and three replicates were for each one established. The plates were at 28 °C for 48 hours incubated. Those isolates that showed a yellow halo around the growth were taken as positive results, indicating the solubilization of the phosphate salts.

Following the same procedure, the solubilization capacity of potassium in the Alexandrov medium was determined using dipotassium hydrogen phosphate (K₂HPO₄) and potassium oxide (K₂O) as potassium sources. The plates were at 28 °C incubated for 48 h and the isolates that had a solubilization halo around the colonies were as positive results taken.

To determine the antagonistic activity against the Fusarium oxysporum EC20-E-GM strain (belonging to the strain of the plant pathology laboratory of the Center for Biotechnological Research of Ecuador), the mycelium was cut with a sterile scalpel. This was in a Falcon tube placed with 20 ml of sterile distilled water and subsequently sterilized steel pellets, 4 mm in diameter were added. The bottle was shaken vigorous and manually for 5 min and the contents were filtered with a 40-µm sieve mounted on a sterile Falcon tube. The 200 µl of the sieved solution were seeded in Potato Dextrose Agar, and the bacterial isolates were spotted on this point at the rate of four isolates per plate. Incubation was at 28 °C for 7 days. The isolates that showed a fungal growth inhibition halo with a radius greater than 0.5 mm were as positive results for the antagonistic activity taken.

The extraction of the genetic material was carried out by alkaline lysis. A colony was from the axenic culture taken and placed in Eppendorf with 40 μl of NaOH at 0.20 M. It was then at 10 %, power of 700 W for one minute microwaved and immediately cooled on ice for 5 min. The lysed cells were for 10 min at 10,000 gravities spun. The supernatant was taken and the nucleic acid quantification was performed by spectrophotometry using the NanoDropTM 2000 at 260 nm, and the ratio 260/280 and 260/230 were calculated in search of determining the concentration and quality of the DNA, respectively.

For the amplification, 25 µl of the PCR mixture containing 1 µl of the crude extract containing DNA, 1 µl (10 µM) of the universal primers 27F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') and 1492R (5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-) were used. 3') (10), which allow obtaining amplicons of around 1500 bp, and GoTaq^® Green Master Mix (Promega Corporation, USA). Amplification was performed in an MS mini thermocycler (Major Science, USA) under the following parameters: initial denaturation 95 °C for 10 minutes and additional denaturation for 1 minute at 92 °C, 35 cycles of 72 °C each, for 2 minutes. Amplification products were verified by 1 % agarose gel electrophoresis (1 g agarose in 150 mL of 1X TAE buffer) at 80 V for 45 min. The reaction products were purified using the prior to sequencing, was performed by the Sanger method at the Macrogen^® Company (Republic of Korea)

A quality analysis was performed of the sequences obtained using the FinchTV program (ver. 1.4.0) (Geospiza Inc.) using as a criterion of acceptance a quality value (Q) equal to or greater than 20 per base. They were subsequently analyzed using the BLASTn program ¹¹. The cutoff value used was 1 x 10^-5, with a minimum coverage of approximately 80 %. The debugging and alignment of the obtained sequences were performed using the ClustalW multiple sequence alignment tool ¹² in the MEGA-X program (ver. 10.0.4) ¹³.

The 59 isolates obtained presented flat, translucent, mucous colonies with smooth edges, characteristics similar to those described by other author ⁵. From these, 86.4 % (51 isolates) were gram-negative and, in turn, 94.1 % (48 isolates) coincided with the proposed morphological specifications for the genus Stenotrophomonas: gram-negative bacilli or cocobacilli not sporulated. Many bacterial genera develop in the soil, however, in absolute numbers; there is a predominance of gram-negative bacteria over gram-positive bacteria ¹⁵. In the particular case of the rhizosphere, the roots have a direct influence on the composition and density of the soil microbiota. The release of organic plant substances favors the establishment of heterotrophic microbial populations that, for the most part, comprise gram-negative bacilli and actinomycetes ¹⁵.

The genus Stenotrophomonas presents the ability to perform the FBN, so the Rennie and JMV media were used to rule out those isolates that do not perform this function; and 41.7 % (20 isolates) grew in the media. Red Ferralitic soils are the most common in the Habana-Matanzas plain, an area that includes the sampled area. In general, the productivity of these soils is high due to the depth and characteristics of their horizons; however, they are poor in organic matter and have low fertility ⁹, which can translate into poor nitrogen concentrations. These characteristics could favor the proliferation and activity of diazotrophic microorganisms such as Stenotrophomonas. FBN occurs as a function of the concentration of the element in the medium, responding to the principle of cellular economy. The presence of high concentrations of nitrogenous compounds inhibits the synthesis of nitrogenase, the enzyme responsible for the process, by repressing the expression of the nif genes that encode it. In this way, the microorganism preferably uses these elements as a nitrogen source, instead of carrying out a process that involves high-energy consumption, such as FBN. On the other hand, it is argued that any deficiency in organic and inorganic nitrogenous compounds stimulates N₂ microbial fixation ^{(16, 17)}.

The means used in the isolation of nitrofixing bacteria were completely devoid of nitrogen sources and included in its composition, sodium molybdate salt dihydrate (Na₂MoO₄.2H₂O) as a source of molybdenum, a structural component of the enzyme nitrogenase ¹⁷. Both aspects favored the synthesis and activity of the enzyme, and therefore allowed microbial growth under these conditions.

The 20 isolates that showed the ability to perform the FBN, grew in the NBRIP medium. The carbon source present in said medium is glucose, which constitutes the sugar most used as a carbon source in culture media; and there are few microorganisms with the inability to metabolize it ¹⁷.

The 75 % (15 isolates) of these isolates developed a solubilization halo against the different phosphorus sources used (Table 1).

Aluminum phosphate was the least consumed source, with nine isolates; while tricalcium phosphate and iron phosphate were more successful with 13 and 15 isolates respectively. The iron content in Red Ferralitic soils is high ⁹, making it more likely that phosphate will establish bonds with ferric ions compared to other ions, and in turn, the microorganisms present in these soils are more familiar with these compounds.

The formation of the solubilization halos occurs because of the cation exchange carried out by organic acids secreted by the bacteria. These compounds convert insoluble phosphate to soluble forms of the salt ¹⁸.

On the other hand, the presence or not of the halo around the colony is not a sufficient criterion to classify the microorganisms as phosphorus solubilizers ¹⁹. The solubilization of phosphorous salts could occur by the binding of a chelating agent to the cations, displacing the phosphate groups. These reactions, although they allow the phosphate to be solubilized, do not produce halo in the culture medium. Therefore, although the possibility that some of the isolates studied here may not have the ability to solubilize any of the phosphate salts used, it cannot be ruled out that there may be isolates with solubilizing potentialities and, due to the methodology used, it has not been possible to determine ²⁰.

Regarding the solubilization of potassium, 60 % (12 isolates) of the isolates grew in Aleksandrov's medium and of these, 16.6 % (2 isolates) developed a halo of solubilization. This medium has as its carbon source and the main component sucrose. Disaccharide that not constitute the most attractive carbon source for most microorganisms.

Some authors associate the solubilization of potassium with the production of acids of microbial origin ²¹. This could have been the mechanism used to form the solubilization halo. However, as in the phosphate solubilization, there are studies that indicate that this occurs without the release of acids into the medium, and therefore without the decrease in pH ²².

The antagonistic activity against Fusarium oxysporum was positive in 30 % (6 isolates) of the isolates. A large number of pathogens that cause significant economic damage to its production attacks corn in tropical environments. These include species of the genus Fusarium²³ that cause ear rot, which, in addition to reducing yield, cause deterioration and poor quality of grains, and due to the ability to produce mycotoxins, they are also to diseases in their diners related ²⁴.

Four bacterial genera belonging to the Phylum Proteobacteria were identified, a group especially abundant in the rhizosphere during the different phenological stages of maize ^25,26. These included Enterobacter, Pseudomonas, Rhizobium and Stenotrophomonas with a percentage of identity greater than or equal to 97 in 95 % of cases (Table 2).

The most representative genera were Stenotrophomonas and Pseudomonas for 35 % of the total in each case (7 isolates). Similar results were obtained in the Daucus carota L. rhizosphere ⁶. To a lesser extent, the genera Rhizobium and Enterobacter were identified with 25 % (5 isolates) and 5 % (1 isolate) of appearance respectively.

It is common to find reports of pathogenicity associated with the genera Stenotrophomonas, Pseudomonas and Enterobacter, in humans, animals and even plants ^27-30. However, on many occasions, the presence of virulence factors and the pathogenicity of microorganisms are restricted to species, and even to specific strains within a genus ¹⁷. The pathogenic character that some of these genera may present does not detract from the biostimulant potentialities that they develop in plants; although they are not exempt from the eco-toxicological tests established for the agricultural exploitation of microorganisms.

The genus Pseudomonas have been widely reported as PGPR of various plants including grasses ^5,6,15,31. Populations of Pseudomonas frequently stand out above other diazotrophic genera due to their short latency period, rapid growth rate, and metabolic versatility ³². On the other hand, Enterobacter has been described as a rhizospheric microorganism and, above all, as an endophyte of different plant species; standing out for its growth promoting characteristics ^33,34. In the case of the Rhizobium genus, isolations have been made as endophytes of corn ³⁵ and to a lesser extent of the rhizosphere ³⁶; mainly in soils where the crop rotation system is applied with some legume species. The use of Phaseolus vulgaris L. as a rotation culture in this study, may have favored the establishment of rhizobia populations, since this legume presents greater susceptibility to colonization and symbiosis with species of the Rhizobium genus with respect to other genera rhizobia ³⁷.

Stenotrophomonas has been isolated from various environments, from different soil types to animal intestinal tracts ³⁸, which highlights the ubiquitous character of this bacterium. The Stenotrophomonas pavanii species is in bioremediation processes at industrial ³⁹ and agricultural ⁴⁰ levels used, while Stenotrophomonas maltophilia has a contrasting behavior in the different habitats it occupies. This species is common in hospital settings and some strains are as powerful nosocomial agents described; however, it is described as part of the normal edaphic microbiota and is associated with many crops of agricultural interest without causing damage to them ⁴¹. Likewise, it occurs with Stenotrophomonas rhizophila, which shows great potential to promote the growth of plants such as soybeans ⁴², cotton, tomato and pepper, among others; and it is considered a planktonic microbiota of marine environments ⁴³.

In this study, the most comprehensive isolate in terms of the plant growth promotion mechanisms evaluated was INCA-FRr1, identified as Stenotrophomonas rhizophila. The ability to solubilize different sources of phosphorus and potassium, to perform FBN and antagonistic activity against phytopathogens, in addition to other positive characteristics that were not in this study demonstrated but are known ⁶; they represent clear advantages over other rhizospheric bacterial genera ⁴³. On the contrary, they use a strain of Stenotrophomonas rhizophila that does not present the ability to perform the FBN and still obtain important results in terms of development of variables such as height, stem and root length, dry area and leaf biomass in basil plants. This could suggest the presence of other mechanisms for promoting plant growth. In co-inoculation tests of Stenotrophomonas rhizophila with Arbuscular Mycorrhizal Fungi (AMF), compared to simple inoculations, an increase in plant growth and chlorophyll content is observed ⁴⁴; consequently, the bacterium is also classified as a mycorrhizal enhancer (term known as Mycorrhiza Helper Bacteria, MHB) ^{(45, 46)}.

The success of bioproduct use lies, among other aspects, in obtaining strains compatible with the crop in question ⁴⁷ and efficient for achieving the desired yields. In this way, the use of native PGPRs as inoculants promotes ecological-sustainable management of agroecosystems as well as, could improve corn production. The ability of native strains to interact positively with the resident soil microbiota and their adaptability to local climatic and agro-ecological conditions often enhances their performance compared to non-native strains.