Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners), pertenece a la familia Gentianaceae, es una planta herbácea bienal, cultivada como anual, de tallo erecto, con follaje y flores vistosas ¹. Es una planta ornamental de corte, nativa de los estados del Norte de México y el sur de Estados Unidos. Actualmente, se cultiva principalmente en Japón, Europa y Estados Unidos debido a la gran diversidad de flores y alta productividad que presenta ². Su hábitat natural le permite adaptarse a condiciones de baja humedad relativa y temperaturas, hasta cierto punto, extremas; crece a lo largo del cauce de ríos y arroyos, donde siempre tiene acceso al agua ³.

El interés de la producción de esta especie se relaciona con la gran diversidad de flores y su elevada productividad ⁴. Lisianthus es un cultivo floral relativamente nuevo en el mercado internacional; sin embargo, se ha ubicado rápidamente entre las principales flores de corte a nivel global. En el año 2012 en Estados Unidos y Taiwán se comercializaron entre 10 y 14,9 millones de tallos de Lisianthus, respectivamente. En el año 2008, en Japón se comercializaron 23,4 millones de tallos de esta especie; además, se debe destacar que Lisianthus ocupó el tercer lugar entre las especies ornamentales por superficie sembrada (435 ha) y en ese mismo año, en Taiwán se ubicó en el sexto lugar, también por superficie sembrada (130 ha), mientras que en los Países Bajos alcanzó el décimo lugar (45 ha). Durante los años 2017 y 2018, se ha continuado incrementado la superficie de siembra de esta especie ornamental por su elevado potencial productivo y para su comercialización ⁵.

Según estudios realizados ⁶, la propagación por semillas de las plantas de Lisianthus es complicada y difícil, debido a la lenta germinación y crecimiento. Además, las poblaciones de plántulas que se obtienen son variables con respecto al tiempo de floración, la longitud del tallo y las cualidades de las flores. La propagación vegetativa de cultivares seleccionados puede proporcionar una alternativa útil a la propagación de semillas.

Por lo tanto, la micropropagación sirve como una potente herramienta para desarrollar un método de propagación rápida de genotipos seleccionados de Lisianthus. La multiplicación clonal de estas flores de corte, especialmente a través del cultivo de tejidos, puede proporcionar una alternativa útil a la propagación por semillas, por lo que se obtiene material de plantación de mejor calidad. La multiplicación in vitro de genotipos élites ofrecen la oportunidad para multiplicar gran cantidad de material de siembra libre de enfermedades y vigoroso en el menor tiempo posible ⁶.

La introducción en Cuba, a través del intercambio de germoplasma resulta de gran importancia, ya que contribuye a incrementar la diversidad de flores de corte, una vez que se tenga una metodología para su multiplicación. Por otra parte, se abrirían nuevos horizontes para la investigación en la fisiología y mejoramiento genético para las condiciones edafoclimáticas del país.

Una vez finalizada la propagación in vitro de las plántulas es imprescindible la adaptación de las mismas a las condiciones ambientales ex vitro no controladas, tanto en casa de cultivo como en condiciones de campo; esta fase se conoce como aclimatización. Las plantas deben aclimatizarse desde el punto de vista morfológico y fisiológico después de su transferencia del cultivo in vitro a las condiciones ex vitro; es decir, que cambian su metabolismo heterotrófico o mixotrófico al autótrofo ⁷.

Como resultado del ambiente in vitro, las plantas presentan una anatomía y fisiología diferente a las que son cultivadas en condiciones de campo o casas de cultivo ⁸. Los desórdenes observados afectan todos los órganos de la planta, aunque no todos tienen el mismo peso sobre el comportamiento ex vitro. Dentro de estos desórdenes se encuentran el pobre desarrollo del aparato fotosintético, de la cutícula de las hojas, la emisión de raíces no funcionales sin conexión con los haces conductores y otros más que pueden afectar la supervivencia de las plantas en la fase de aclimatización ⁹.

La introducción de sustancias activas de producción nacional en la metodología de regeneración in vitro de plantas de Lisianthus, pudiera constituir una alternativa para mejorar el enraizamiento y aclimatización ex vitro de las plántulas.

De las sustancias bioactivas de mayor uso en la actualidad se encuentra el bioestimulador del crecimiento de producción nacional llamado Pectimorf^®, que es mezcla de (1-4) α-D-oligogalacturónidos, con grado de polimerización de entre 9 y 16 ^(10,11). El mismo ha sido estudiado en cultivos como papaya (Carica papaya L.), cultivar “Maradol roja” (16) y ajo (Allium sativum L.), clon ‘Criollo-9’ (17), con resultados favorables. Puede resultar una alternativa para la propagación in vitro de diferentes cultivares de Lisianthus, con lo cual se lograría mayor uniformidad de las plántulas y se alcanzaría un mayor vigor y supervivencia de las mismas durante la fase de aclimatización.

Por todo lo antes expuesto el objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia de un oligogalacturonido de origen péptico (mOLG) en vitroplantas de Lisianthus cultivar ‘Mariachi blue’ durante la fase de aclimatización.

El experimento se llevó a cabo en el Departamento de Genética y Mejoramiento de las Plantas del Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas (INCA), Cuba.

En relación con el porcentaje de supervivencia de las plantas hubo diferencias significativas entre los tratamientos (Figura 1). Los mejores resultados los obtuvieron las plantas del tratamiento 3 [Aspersión foliar en el momento del trasplante (AFMT) y15 días después del trasplante (AFDT) con la mOLG (1 mgL^-1)], con 100 % de supervivencia y se diferenciaron de las del resto de los tratamientos. En general, las plantas cuando se les aplicó el AIA o la mOLG con independencia de la concentración, la supervivencia fue elevada, osciló entre 90-100 %; solo las plantas del tratamiento control, obtuvieron una supervivencia inferior al 90 %.

Según algunos autores ¹³, al transferir las plántulas de Lisianthus provenientes del cultivo in vitro a una sustrato compuesto por una mezcla de cáscara de arroz quemado y estiércol orgánico y sumergiéndolas en una solución de pesticida al 1 % y recubriendo las macetas con un plástico transparente, durante 15 días, en un área de intensidad de luz reducida (100-120 μmolm^-2s^-1) se produjo una elevada supervivencia de las mismas (81-100 %), 90 % como promedio después de un mes de aclimatización.

En estudios realizados en las plántulas de Lisianthus¹⁴, en un medio de cultivo basal MS enriquecido con AIB (0,5 y 1,5 mgL^-1) presentaron un mejor porcentaje de enraizamiento in vitro; se aclimatizaron mejor y al transferirlas a invernadero mostraron un crecimiento normal y una supervivencia del 90 %.

En la Figura 1 se observa el porcentaje de enraizamiento de las plantas y hubo diferencias significativas entre los tratamientos. Los mejores resultados se obtuvieron con el empleo del AIA (Tratamiento 2) y la mOLG (1, 5 y 10 mgL^-1) con la AFMT y con la AFDT, con 100 % de enraizamiento, sin diferencias entre las plantas, pero sí se diferenciaron de las del tratamiento control, que obtuvieron un 90 % de enraizamiento.

Los mejores resultados con las plantas de Lisianthus cultivar 'Azul', según algunos autores ¹⁵, se obtuvieron con concentraciones de AIA de 1000 y 500 ppm (mgL^-1), equivalentes a 100 y 92 % de enraizamiento, respectivamente.

Por otra parte, algunos autores plantearon que en la papaya (Carica papaya L.) cultivar ‘Maradol roja’, el mayor porcentaje de plantas con raíces (84,2 %) se obtuvo con la concentración de 9 mgL^-1 de Pectimorf^® en complemento con la auxina AIB ¹⁶.

También otros autores informaron en el ajo (Allium sativum L.) clon ‘Criollo-9’, que el enraizamiento de los microbulbillos se incrementó mediante su inmersión 15 minutos y la aspersión foliar 15 días después de la plantación en una solución de Pectimorf^® (10 mgL^-1) y cuando los mismos se plantaron en un sustrato compuesto por zeolita [litonita] (25 %) y materia orgánica [cachaza descompuesta] (75 %) ¹⁷.

Puede existir una activación de la biosíntesis de los oligogalacturónidos como la mOLG cuando se aplican exógenamente en las plantas e influyen en la supervivencia de las mismas y, por consiguiente, en su crecimiento y desarrollo. Por otra parte, durante la fase de aclimatización, es probable que las plantas acumularan mayor biomasa durante la fase in vitro, que las condicionó favorablemente para sobrevivir al estrés provocado por el cambio a las condiciones ex vitro.

Con respecto a la altura de las plantas hubo diferencias significativas entre los tratamientos (Figura 2). Los mejores resultados lo obtuvieron las plántulas del tratamiento 3 que se trataron con la mOLG (1 mgL^-1) [9,37 cm] y los más bajos fueron las del tratamiento 1 (Control) [6,53].

Se informó que las plantas de Lisianthus, tratadas con diferentes dosis de nitrógeno (50-300 mg) suministradas por fertirrigación no tuvo influencia en la altura del pedúnculo, que osciló entre 3,31-5,06 cm ¹⁸.

Según algunos autores, informaron que los mejores resultados se obtuvieron con la inmersión de las raíces de las plántulas durante 15 minutos y la aspersión foliar de las mismas 15 días después de la plantación con Pectimorf^® (5 y 10 mgL^-1), cuyos valores respectivos fueron 14,17 y 14,42 cm ¹⁹, sin diferencias estadísticas entre ellos ni con ANA a la concentración de 10 mgL^-1, con 14,12 cm de altura.

En la propia Figura 2, se aprecia que no hubo diferencias significativas entre los tratamientos con respecto al número de hojas, que osciló entre 9-10 por plantas. Resultados similares se informaron en ajo, clon ‘Criollo-9’ ¹⁷, con un número de hojas que fue de 2,37 cuando se realizó la inmersión de las raíces durante 15 minutos en una solución de Pectimorf^® (10 mgL^-1), pero sin diferencias estadísticas con esa oligosacarina, a la concentración de 5 mgL^-1 (2,27) o en ANA (10 mgL^-1) (2,20) y la aspersión foliar de las plántulas 15 días después de la plantación con la misma concentración de esas sustancias.

En relación con la masa fresca y seca de las plantas hubo diferencias significativas entre los tratamientos (Tabla 2). En el primer caso, los mejores resultados fueron para las plantas del tratamiento 5 (1,88888 g) y en el segundo caso, las del tratamiento 3 (0,209845 g). En ambos casos, las plántulas tratadas con la mOLG con independencia de la concentración (1, 5 o 10 mgL^-1) alcanzaron resultados superiores a las tratadas con AIA o las del tratamiento control.

Según otros autores, las plántulas de Lisianthus cultivar ‘Mariachi blue’, cultivadas en zeolita modificada cargada con Ca²⁺ mostraron una mayor masa fresca de la plántula. Lo planteado, puede deberse a que el calcio interviene en la división celular, permeabilidad de las membranas celulares, por lo que le proporciona vigor a la planta ².

Algunos autores, informaron que en el cultivo de la papa (Solanum tuberosum L.) la masa fresca de los minitubérculos fue mayor en las variedades ʻYuya’ con 18,67 g y ‘Grettel’ con 23,20 g, sin diferencias significativas entre ellas y sí con el resto de las variedades²⁰. De igual manera, ‘Grettel’ mostró los mayores valores en la masa seca de los minitubérculos con 19,3 g sin diferencias significativas con ‘Ibis’ que alcanzó 19,4 g.

De acuerdo con estudios realizados⁾, las variables masa fresca y masa seca de los rizomas no mostraron diferencias entre los tratamientos evaluados ²¹, obteniéndose valores de 11,88 g y 2,52 g respectivamente, valores similares a los obtenidos para el cultivo.

En el contenido de clorofilas en las plantas hubo diferencias significativas entre los tratamientos, tal como lo refleja la Tabla 2. Los mejores resultados lo alcanzaron las plantas del tratamiento 3 (AFMT) y (AFDT), con 70,97 unidades SPAC, que se diferenciaron de las plantas del tratamiento control, con 56,33 unidades SPAC. En sentido general, las plántulas que se trataron con la mOLG con independencia de la concentración fueron superiores a las del resto de los tratamientos, una vez finalizada la fase de aclimatización.

Los resultados anteriores pudieran indicar, que las plantas tratadas con la mOLG (Pectimorf^®) al finalizar su aclimatización, están mejor nutridas y es posible que tengan un mayor contenido de clorofilas totales y, por consiguiente, están lista para su trasplante definitivo a macetas o campo.

Según algunas investigaciones realizadas, con diferentes líneas híbridas de Lisianthus encontró un elevado porcentaje de clorofila (unidades SPAC) en las líneas L₅ (‘Nandini Lemon Doublel’) [60,5 %], seguida por L₉ (‘Nandini Royal Violoet’) [58,3 %] y L₈ (‘Nandini rose’) [54,8 %], mientras que los peores resultados fueron para el híbrido L₁₅ (‘Nandini Lavender’) [33,3 %] ²². Otros autores también observaron una variación similar en el porcentaje de clorofilas en un estudio realizado con ocho líneas de Lisianthus ²³; así como en crisantemo ²⁴.

De acuerdo con estudios realizados, informaron que las plántulas de Lisianthus presentaron una respuesta similar en cuanto al contenido de pigmentos al aumentar la Conductividad Eléctrica (CE) [2,5; 4; 6 y 8 dSm^-1] y el contenido de clorofilas totales respectivo fue: 2,85; 3,08; 2,05 y 2,79 mgg ^{_{-1 (25)}} . Agregaron, que en las soluciones de 6 dSm^-1 se observó una disminución en la concentración de clorofilas, la cual posteriormente se recuperó cuando las plantas se irrigaron con soluciones de 8 dSm^-1; las plantas tratadas con Ca²⁺ adicional, logaron mantener una mayor concentración de los pigmentos en comparación con aquellas tratadas con 9 meqL^-1 de Ca²⁺ cuando la CE de la solución fue de 6 y 8 dSm^-1.

Los resultados relacionados con el Contenido Relativo de Agua (CRA) se muestran en la Tabla 2. Hubo diferencias significativas entre las plantas de los diferentes tratamientos. Los mejores resultados fueron para los tratamientos 3 y 4, con 90,75 y 89,57 %, respectivamente, sin diferencias significativas entre ellos; mientras que los resultados más bajos fueron para las plantas que se obtuvieron con el tratamiento 1 (control), con 80,00 %.

En estudios realizados con plantas de Lisianthus²⁵, el CRA en hojas jóvenes osciló entre 69,7-89,1 % y en las maduras (76,0-80,3 %); en ambos casos; por lo general, disminuyó en plantas con 9 meqL^-1 de Ca²⁺; sin embargo, en plantas suplementadas con Ca²⁺ adicional, se observó un aumento en el CRA, el cual supera al de las plantas con 9 meqL^-1 cuando se trataron con soluciones de CE mayor de 4 dSm^-1.

El mantenimiento del CRA en hojas jóvenes estuvo relacionado con la acumulación de una mayor biomasa por parte de las plantas tratadas con la mOLG, lo demás pudiera estar relacionado con un mayor potencial hídrico en las hojas.

Los bioestimuladores del crecimiento Biobras-6^® (0,2 (molL^-1) y Pectimorf^® (0,47 (molL^-1), influyeron positivamente en el CRA de las plantas de banano (Musa spp.) clon ‘FHIA-18’ (AAAB), cuando se sumergieron las raíces de las mismas y 15 días después de la plantación se asperjaron con las soluciones anteriores, los valores fueron 96,64 y 96,7 %, respectivamente ²⁶.

La fotosíntesis, la transpiración y la conductancia estomática fueron otras variables fisiológicas que se evaluaron al finalizar la fase de aclimatización de las plantas de Lisianthus cultivar ‘Mariachi blue’. Hubo diferencias significativas entre los tratamientos (Tabla 2). Los mejores resultados lo obtuvieron las plantas del tratamiento 3 (AFMT y AFDT), con una fotosíntesis de 12,873 μmol CO₂m^-2s^-1, la transpiración fue de 11,273 mmol H₂Om^-2s^-1 y la conductancia estomática de 0,508 mmolm^-2s^-1. En sentido general, las plantas que se obtuvieron con la mOLG (Pectimorf^®), con independencia de la concentración, mostraron los mejores resultados, cuando se evaluaron las variables fisiológicas anteriores.

Otros autores plantearon que las plantas del cultivar de Lisianthus ‘ABC Blue’, con independencia de la concentración de Ca²⁺ en la solución nutritiva, la CE afectó la tasa de fotosíntesis al presentarse una disminución ^₂₅₎ cuando la CE fue de 4 dSm^-1(con 9 meqL^-1 de Ca²⁺, la fotosíntesis fue de 10,1 μmol CO₂m^-2s^-1ycon 13 meqL^-1de Ca²⁺, la fotosíntesis fue de 9,4 μmol CO₂m^-2s^-1) ; sin embargo, al aumentarla hasta 6 dSm^-1 (con 9 meqL^-1 de Ca²⁺, la fotosíntesis fue de 10,6 μmol CO₂m^-2s^-1 y con 13 meqL^-1 de Ca²⁺, la fotosíntesis fue de 11,4 μmol CO₂m^-2s^-1) y 8 dSm^-1 (con 9 meqL^-1 de Ca²⁺, la fotosíntesis fue de 12,4 μmol CO₂m^-2s^-1 y con 13 meqL^-1 de Ca²⁺, la fotosíntesis fue de 12,0 μmol CO₂m^-2s^-1), la tasa de fotosíntesis se recupera a niveles comparables al de las plantas con baja CE.

En general, en las plantas de Lisianthus cultivar ‘ABC Blue’, la conductancia de la hoja (con 9 meqL^-1 de Ca²⁺, osciló entre 0,241-0,308 mol H₂Om^-2s^-1 y con 13 meqL^-1 de Ca²⁺, fue entre 0,219-0,312 mol H₂Om^-2s^-1), así como la tasa de transpiración (con 9 meqL^-1 de Ca²⁺, osciló entre 9,2-10,2 mmol H₂Om^-2s^-1 y con 13 meqL^-1 de Ca²⁺, fue entre 8,6-10,5 mmol H₂Om^-2s^-1); por lo general, disminuyeron conforme se aumentaba la CE, independientemente del nivel de Ca²⁺ en la solución nutritiva ²⁵.

Los resultados que se obtuvieron en las plantas in vitro de papaya (Carica papaya L.) cultivar ‘Maradol roja’ a los 37 días de cultivo, durante la fase de aclimatización, mostraron que el empleo de AIB (2 mgL^-1) con zeolita como soporte, alcanzaron los mejores resultados con respecto a la fotosíntesis (3,828 μmol CO₂m^-2s^-1), transpiración (1,506 mmol H₂Om^-2s^-1) y conductancia estomática (34,85 mmolm^-2s^-1) y superaron a los tratamientos en los que se empleó el Pectimorf^® (7, 9 y 12 mgL^-1) y AIB (2 mgL^-1) ¹⁷.

Los resultados antes expuestos ¹⁷ no coinciden con los de este trabajo, ya que la mOLG (Pectimorf^®) con independencia de la concentración empleada (1, 5 y 10 mgL^-1) favoreció la fotosíntesis, la transpiración y la conductancia estomática de las plantas de Lisianthus cultivar ‘Mariachi blue’; por lo que, para la aclimatización de las plántulas se debe emplear un sustrato compuesto por 75% de materia orgánica (cachaza descompuesta) y 25% de suelo Ferralítico Rojo compactado eútrico y realizar la aspersión foliar de las plántulas en el momento del trasplante y 15 días después de la plantación a razón de 2 mL por plántula con la mOLG (Pectimorf^® [1 mgL^-1]).

El empleo del bioestimulador de origen péctico (mOLG) tuvo un efecto positivo en las variables morfológicas y fisiológicas que se evaluaron en las plantas de Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners) cultivar ‘Mariachi blue’ al finalizar la fase de aclimatización.

Que se realicen estudios de diferentes sustratos y condiciones de cultivo, así como del rendimiento y la calidad postcosecha de Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners) cultivar ‘Mariachi blue’, como flor de corte.

Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners), belongs to the Gentianaceae family, is a biennial herbaceous plant, grown as an annual, with an erect stem, with showy foliage and flowers ¹. It is an ornamental cut plant, native to the states of northern Mexico and southern United States. Currently, it is grown mainly in Japan, Europe and the United States due to the great diversity of flowers and high productivity it presents ². Its natural habitat allows it to adapt to conditions of low relative humidity and temperatures, to some extent, extreme; it grows along the river and stream beds, where it always has access to water ³.

The interest in this species production is related to flower great diversity and their high productivity ⁴. Lisianthus is a relatively new flower crop on the international market, yet it has quickly become one of the top cut flowers globally. In 2012 in the United States and Taiwan between 10 and 14.9 million stalks of Lisianthus were marketed, respectively. In 2008, 23.4 million stems of this species were marketed in Japan. Furthermore, it should be noted that Lisianthus ranked third among the ornamental species by planted area (435 ha) and in that same year, in Taiwan it was ranked sixth also by planted area (130 ha), while in Netherlands reached the tenth place (45 ha). During the years 2017 and 2018, the sowing area of this ornamental species has continued to increase due to its high productive potential and for its commercialization ⁵.

According to studies carried out ⁶, the propagation by Lisianthus seeds is complicated and difficult due to slow germination and growth. Furthermore, the seedling populations that are obtained are variable with respect to flowering time, stem length and flower qualities. Vegetative propagation of selected cultivars can provide a useful alternative to seed propagation.

Therefore, micropropagation serves as a powerful tool to develop a rapid propagation method of selected Lisianthus genotypes. Clonal multiplication of these cut flowers, especially through tissue culture, can provide a useful alternative to seed propagation, resulting in higher quality planting material. The in vitro multiplication of elite genotypes offers the opportunity to multiply a disease-free large quantity and vigorous planting material in the shortest possible time ⁶.

The introduction in Cuba, through the exchange of germplasm is of great importance, since it contributes to increase the diversity of cut flowers, once a methodology for their multiplication is in place. On the other hand, new horizons would be opened for research in physiology and genetic improvement for the edaphoclimatic conditions of the country.

Once the seedling in vitro propagation is completed, it is essential to adapt them to uncontrolled ex vitro environmental conditions, both in the grow house and in field conditions. This phase is known as acclimatization. Plants must adapt from the morphological and physiological point of view after their transfer from in vitro culture to ex vitro conditions, that is, they change their heterotrophic or mixotrophic metabolism to autotrophic ⁷.

As a result of the in vitro environment, plants present an anatomy and physiology different from those that are cultivated in field conditions or cultivation houses ⁸. The observed disorders affect all plant organs, although not all have the same weight on the ex vitro behavior. Among these disorders are the poor development of the photosynthetic apparatus, of leaf cuticle, the emission of non-functional roots without connection with the conductive bundles, and others that can affect plant survival in the acclimatization phase ⁹.

The active substance introduction of national production in the in vitro Lisianthus plant regeneration methodology, could constitute an alternative to improve the rooting and ex vitro seedling acclimatization.

One of the most widely used bioactive substances today is the nationally produced growth biostimulator called Pectimorf^®, which is a mixture of (1-4) α-D-oligogalacturonides, with a polymerization degree between 9 and 16 ^10,11. It has been studied in crops such as papaya (Carica papaya L.) cultivar 'Maradol roja' (16) and garlic (Allium sativum L.) clone 'Criollo-9' (17) with favorable results. It would be an alternative for the in vitro propagation of different Lisianthus cultivars, which would achieve greater uniformity of seedlings and achieve greater vigor and survival of them during the acclimatization phase.

For all the above, the objective of this work was to evaluate the oligogalacturonide influence of peptic origin (mOLG) on Lisianthus cultivar ‘Mariachi blue’ vitroplants during the acclimatization phase.

The experiment was carried out in Genetics and Plant Improvement Department of the National Institute of Agricultural Sciences, Cuba.

In relation to the percentage of survival of the plants, there were significant differences between the treatments (Figure 1). The best results were obtained by the plants of treatment 3 [Foliar spray at the time of transplantation (AFMT) and 15 days after transplantation (AFDT) with mOLG (1 mgL^-1)], with 100 % survival and it differed from the rest of treatments. In general, the plants when the IAA or the mOLG was applied regardless of the concentration, the survival was high, it ranged between 90-100 %; only the plants of the control treatment obtained a survival of less than 90 %.

According to some authors ¹³, when transferring Lisianthus seedlings from in vitro culture to a substrate composed of a mixture of burnt rice husk and organic manure, and immersing them in a 1 % pesticide solution and covering the pots of transparent plastic for 15 days in an area of reduced light intensity (100-120 μmolm^-2s^-1) produced a high seedling survival (81-100 %), 90 % on average after one acclimatization month.

In studies carried out on Lisianthus seedlings ¹⁴, in a basal culture medium DM enriched with AIB (0.5 and 1.5 mgL^-1) they presented a better percentage of rooting in vitro; they acclimatized better and when transferred to the greenhouse they showed normal growth and survival of 90 %.

Figure 1 shows the percentage of rooting of the plants, and there were significant differences between the treatments. The best results were obtained with the use of IAA (Treatment 2) and mOLG (1, 5 and 10 mgL^-1) with AFAT and with AFDT, with 100 % rooting, without differences between them, but with the treatment control, which obtained 90 % rooting.

The best results with Lisianthus cultivar 'Azul' plants, according to some authors ¹⁵, were obtained with IAA concentrations of 1000 and 500 ppm (mgL^-1), equivalent to 100 and 92 % rooting, respectively.

On the other hand, some authors ¹⁶ stated that in papaya (Carica papaya L.) cultivating 'Maradol roja', the highest percentage of plants with roots (84.2 %) was obtained with a concentration of 9 mgL^-1 of Pectimorf^® in complement with auxin AIB ¹⁶.

Also other authors reported in garlic (Allium sativum L.) clone 'Criollo-9', that the rooting of the microbulbs was increased by immersion 15 minutes and foliar spraying 15 days after planting in a Pectimorf^® solution (10 mgL^-1) and when they were planted in a substrate composed of zeolite [lithonite] (25 %) and organic matter [decomposed filter cake] (75 %) ¹⁷.

There may be an oligogalacturonide biosynthesis activation as mOLG when they are applied exogenously in plants and influence their survival, and consequently, their growth and development. On the other hand, during the acclimatization phase, it is likely that the plants accumulated greater biomass during the in vitro phase, which favorably conditioned them to survive the stress caused by the change to ex vitro conditions.

Regarding plant height, there were significant differences between treatments (Figure 2). The best results were obtained by treatment 3 seedlings that were treated with mOLG (1 mgL^-1) [9.37 cm] and the lowest were those of treatment 1 (Control) [6.53].

Lisianthus plants, treated with different doses of nitrogen (50-300 mg) supplied by fertigation, had no influence on peduncle height, which ranged between 3.31-5.06 cm ¹⁸.

According to some authors, they reported that the best results were obtained with the immersion of the roots of the seedlings for 15 minutes and the foliar spraying of them 15 days after planting with Pectimorf^® (5 and 10 mgL^-1), whose respective values were 14.17 and 14.42 cm ¹⁹, without statistical differences between them or with ANA at a concentration of 10 mgL^-1, with 14.12 cm in height.

In Figure 2, it can be seen that there were no significant differences between the treatments with respect to the number of leaves, which ranged 9-10 per plants. Similar results reported in garlic clone 'Criollo-9' ¹⁷ with a number of leaves was 2.37 when the roots were immersed for 15 minutes in a Pectimorf® solution (10 mgL^-1), but without statistical differences with this oligosaccharin, at the concentration of 5 mgL^-1 (2.27) or in ANA (10 mgL^-1) [2.20] and the foliar spraying of the seedlings 15 days after planting with the same concentration of those substances.

In relation to the fresh and plant dry mass, there were significant differences between the treatments (Table 2). In the first case, the best results were for the plants of treatment 5 (1.88888) and in the second case, those of treatment 3 (0.209845). In both cases, the seedlings treated with mOLG regardless of the concentration (1, 5 or 10 mgL^-1) achieved superior results than those treated with IAA or those of control treatment.

According some authors, to Lisianthus seedlings cultivar ‘Mariachi blue’, cultivated in modified zeolite loaded with Ca²⁺ showed a seedling higher fresh mass. The raised by the previous author, it may be due to the fact that calcium is involved in cell division, permeability of cell membranes, thus providing vigor to the plant ².

Some authors, reported that in the potato (Solanum tuberosum L.) crop the fresh mass of the minitubers was higher in the 'Yuya' varieties with 18.67 g and 'Grettel' with 23.20 g without differences significant among them and yes with the rest of the varieties (20). Similarly, 'Grettel' showed the highest values in the minituber dry mass with 19.3 g without significant differences with 'Ibis' which reached 19.4 g.

According to studies carried out, the variables fresh mass and dry mass of the studies carried out ²¹, the variables fresh mass and dry mass of the rhizomes did not show differences between the evaluated treatments, obtaining values of 11.88 g and 2.52 g respectively, similar values to those obtained by the culture.

In the chlorophyll content in the plants there were significant differences between the treatments, as reflected in Table 2. The best results were achieved by the plants of treatment 3 (AFMT) and (AFDT), with 70.97 SPAC units, which were differentiated from the plants of the control treatment, with 56.33 SPAC units. In general, the seedlings that were treated with mOLG regardless of the concentration were superior to those of treatment rest, once the acclimatization phase had finished.

The previous results could indicate that the plants treated with mOLG (Pectimorf^®) at the end of their acclimatization, are better nourished and it is possible that they have a higher content of total chlorophylls and, therefore, are ready for their definitive transplantation to pots or field.

According to some research carried out, with different hybrid Lisianthus lines, a high chlorophyll percentage (SPAC units) was found in lines L₅ ('Nandini Lemon Doublel') [60.5 %], followed by L₉ ('Nandini Royal Violoet') [58.3%] and L₈ ('Nandini rose') [54.8 %], while the worst results were for the hybrid L₁₅ ('Nandini Lavender') [33.3 %] ²². Other authors also observed a similar variation in chlorophyll percentage in a study carried out with eight lines of Lisianthus ²³; as well as, in chrysanthemum ²⁴.

According to studies carried out, they reported that Lisianthus seedlings presented a similar response in terms of pigment content by increasing Electrical Conductivity (EC) [2.5; 4; 6 and 8 dSm^-1] and the respective total chlorophyll content was: 2.85; 3.08; 2.05 and 2.79 mg g^{-1 (25}. They added that in the 6 dSm^-1 solutions a decrease in chlorophyll concentration was observed, which was later recovered when the plants were irrigated with 8 dSm^-1 solutions; and plants treated with additional Ca²⁺ managed to maintain a higher concentration of pigments compared to those treated with 9 meqL^-1 of Ca²⁺ when the EC of the solution was 6 and 8 dSm^-1.

The results related to the Relative Water Content (RWC) are shown in Table 2. There were significant differences between the plants of the different treatments. The best results were for treatments 3 and 4, with 90.75 and 89.57 %, respectively, without significant differences between them; while the lowest results were for the plants that were obtained with treatment 1 (control), with 80.00 %.

In studies carried out with Lisianthus plants ²⁵, the RWC in young leaves ranged between 69.7-89.1 % and in mature ones (76.0-80.3 %); in both cases, in general, it decreased in plants with 9 meqL^-1 of Ca²⁺; however, in plants supplemented with additional Ca²⁺, an increase in RWC was observed, which exceeds that of plants with 9 meqL^-1 when treated with solutions of CE greater than 4 dSm^-1.

RWC maintenance in young leaves was related to the accumulation of a higher biomass by the plants treated with mOLG, which could also be related to a greater water potential in the leaves.

The growth biostimulators Biobras-6^® (0.2 (molL^-1) and Pectimorf^® (0.47 (molL^-1), positively influenced banana plants RWC (Musa spp.) Clone 'FHIA-18 '(AAAB), when their roots were submerged and 15 days after planting they were sprayed with the previous solutions, the values were 96.64 and 96.7 %, respectively ²⁶.

Photosynthesis, transpiration and stomatal conductance were other physiological variables that were evaluated at the end of the acclimatization phase of the Lisianthus cultivar ‘Mariachi blue’ plants. There were significant differences between the treatments (Table 2). The best results were obtained by the plants of treatment 3 (AFMT and AFDT), with a photosynthesis of 12,873 μmol CO₂m^-2s^-1, transpiration was 11.273 mmol H₂Om^-2s^-1 and stomatal conductance of 0.508 mmolm^-2s^-1. In a general sense, the plants obtained with mOLG (Pectimorf^®), regardless of the concentration, showed the best results, when the previous physiological variables were evaluated.

Other authors stated that the plants of the Lisianthus cultivar 'ABC Blue', with regardless of the concentration of Ca²⁺ in the nutrient solution, the EC affected the photosynthesis rate by presenting a decrease ²⁵⁾ when the EC was 4 dSm ^-1 (with 9 meqL^-1 of Ca²⁺, photosynthesis was 10.1 µmol CO₂m^-2s^-1 and with 13 meqL^-1 of Ca²⁺, photosynthesis was 9.4 µmol CO₂m^-2s^-1). However, when it was increased to 6 dSm^-1 (with 9 meqL^-1 of Ca²⁺, photosynthesis was 10.6 μmol CO₂m^-2s^-1 and with 13 meqL^-1 of Ca²⁺, photosynthesis was 11.4 μmol CO₂m ^-2s^-1) and 8 dSm^-1 (with 9 meqL^-1 of Ca²⁺, photosynthesis was 12.4 μmol CO₂m^-2s^-1 and with 13 meqL^-1 of Ca^2+, photosynthesis was 12.0 μmol CO₂m^-2s^-1), the photosynthesis rate recovers to levels comparable to that of plants with low EC.

In general, in Lisianthus plants cultivating 'ABC Blue', leaf conductance (with 9 meqL^-1 of Ca²⁺, ranged between 0.241-0.308 mol H₂Om^-2s^-1 and with 13 meqL^-1 of Ca²⁺, it was between 0.219-0.312 mol H₂Om^-2s^-1), as well as the transpiration rate (with 9 meqL^-1 of Ca²⁺, it ranged between 9.2-10.2 mmol H₂Om^-2s^-1 and with 13 meqL^-1 of Ca²⁺, it was between 8.6-10.5 mmol H₂Om^-2s^-1), generally decreased as the EC was increased, regardless of the level of Ca^{2 +} in the nutrient solution ²⁵.

The results obtained in the in vitro papaya plants (Carica papaya L.) cultivating 'Maradol roja' at 37 days of culture, during the acclimatization phase, showed that using AIB (2 mgL^-1) with zeolite as a support, they achieved the best results with respect to photosynthesis (3.828 μmol CO²m^-2s^-1), perspiration (1.506 mmol H₂Om^-2s^-1) and stomatal conductance (34.85 mmolm^-2s^-1) and surpassed the treatments in which Pectimorf^® (7, 9 and 12 mgL^-1) and AIB (2 mgL^-1) were used ¹⁷.

The results of the previous authors ¹⁷ do not coincide with those of this work, since the mOLG (Pectimorf^®) regardless of the concentration used (1, 5 and 10 mgL^-1) enhance photosynthesis, transpiration and stomatal conductance of Lisianthus plants cultivar 'Mariachi blue'. Therefore, seedling acclimatization, a substrate composed of 75 % organic matter (decomposed filter cake) and 25 % of compacted Eutric Red Ferrallitic soil must be used and the seedlings foliar spraying at transplantation time and 15 days after planting at a rate of 2 mL per seedling with mOLG (Pectimorf^® [1 mgL^-1]).

The use of the pectic origin biostimulator (mOLG) had a positive effect on the morphological and physiological variables that were evaluated in Lisianthus plants (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners) cultivar 'Mariachi blue' at acclimatization phase end.

These types of studies should be carried out on different substrates and growing conditions, as well as on the performance and postharvest quality of Lisianthus (Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinners) cultivar ‘Mariachi blue’, as cut flower.